Значение фармакогенетики и индивидуализации фармакотерапии. Реакция N-ацетилирования - одна из наиболее важных систем биотрансформации ксенобиотиков. Основные методы определения фенотипа ацетилятора. Клиническая характеристика обследованных пациентов.
Краткое сожержание материала:

Размещено на

Размещено на

министерство здравоохранения Республики Беларусь

Учреждение образования «Гомельский государственный медицинский университет»

Медико-диагностический факультет

Кафедра общей и клинической фармакологии с курсом анестезиологии и реаниматологии

Дипломная работа

ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ НЕИНВАЗИВНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНОТИПА N-АЦЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ 2

Исполнитель: О.Н. Басенкова

Первый руководитель: Е.И. Михайлова

Второй руководитель: А.А. Кудря

Гомель, 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

РЕФЕРАТ

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

УСЛОВНЫЕ СТАТИСТИЧЕСКИЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Значение фармакогенетики и индивидуализации фармакотерапии

1.2 Реакция N-ацетилирования - одна из наиболее важных систем биотрансформации ксенобиотиков

1.3 Методы определения фенотипа ацетилятора

1.3.1 Колориметрия и спектрофотометрия

1.3.2 Газовая хроматография, масс-спектрометрия, флуориметрия

1.3.3 Капиллярный электрофорез

1.3.4 Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

1.3.4.1 Приготовление реактивов и образцов

1.3.4.2 Подготовка хроматографа и проведение анализа

1.3.4.3 Определение фенотипа N-ацетилирования

ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Методология и общая характеристика структуры исследования

2.2 Общеклинические, лабораторные и инструментальные методы обследования пациентов

2.3 Методика определения вариабельности фенотипа N-ацетилтрансферазы 2

2.4 Методы статистической обработки

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Принципы формирования и клиническая характеристика обследованных пациентов

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Фенотипический полиморфизм фермента N-ацетилтрансферазы 2 у здоровых добровольцев

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

РЕФЕРАТ

Структура и объем дипломной работы:

Дипломная работа состоит из реферата, введения, основной части, состоящей из 4 глав, заключения, списка использованных литературных источников. Полный объем дипломной работы включает 50 страниц компьютерного текста, содержит 7 таблиц и 10 иллюстраций, 94 источника (32 - на русском языке и 62 - на иностранных языках).

Цель и задачи

Целью дипломной работы является изучение эффективности метода определения фенотипа N-ацетилирования на основе определения клиренса мочевой кислоты до и после приема кофеина в качестве тестового препарата.

Задачи:

1. Изучить активность фермента NAT2 и распределение фенотипов N-ацетилирования у здоровых добровольцев, проживающих в Юго-Восточном регионе Республики Беларусь, полученных на основе определения клиренса мочевой кислоты до и после приема кофеина в качестве тестового препарата.

2. Сравнить распределение фенотипов N-ацетилирования у здоровых добровольцев, проживающих в Юго-Восточном регионе Республики Беларусь, полученных на основе изучаемого метода и известного способа выявления фенотипа N-ацетилирования по метаболизму тестового лекарственного препарата «изониазид» с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым обнаружением на аппарате «Agilent 1100».

В соответствие с поставленными целью и задачами объектом исследования явились клинически здоровые лица.

Предметом исследования стала активность фермента N-ацетилтрансферазы 2 у здоровых добровольцев, проживающих в Юго-Восточном регионе Республики Беларусь.

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АсINH-Ацетизониазид

БА-Быстрые ацетиляторы

ВЭЖХ-Высокоэффективная жидкостная хроматография

ДНК-Дезоксирибонуклеиновая кислота

ЗД-Здоровые добровольцы

INH-Изониазид

ЛС-Лекарственное средство

МА-Медленные ацетиляторы

НЛР-Нежелательные лекарственные реакции

НПР-Неблагоприятные побочные реакции

NAT1-N-ацетилтрансфераза 1

NAT2-N-ацетилтрансфераза 2

ПЦР-Полимеразная цепная реакция

СД-Сульфадимезин

CYP-Система цитохрома Р-450

Cl-Клиренс вещества

УСЛОВНЫЕ СТАТИСТИЧЕСКИЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

95%ДИ (95% CI) - 95% доверительный интервал

Р - вероятность справедливости нулевой гипотезы

Ф - коэффициент ранговой корреляции Кендалла

Ме - медиана

М - среднее арифметическое значение

S - среднее квадратическое отклонение

ВВЕДЕНИЕ

Достижения медицинской науки и внедрение огромного количества новых лекарственных средств (ЛС) не снижают актуальность проблем эффективной и безопасной фармакотерапии. Когда говорят о безопасности фармакотерапии, приводят впечатляющие цифры: только в США ежегодно регистрируют более 2 млн нежелательных лекарственных реакций (НЛР); более 100 000 человек умирают по причине НЛР; экономический ущерб от НЛР возрос с 76,6 (1997) до 177,4 млрд долларов (2001) [4]. В то же время эффективность фармакотерапии по-прежнему остается недостаточной. Так, по данным B.M. Silber, не отвечают на лекарственную терапию до 40% больных с различными заболеваниями [9].

Одним из путей повышения эффективности и безопасности фармакотерапии является ее индивидуализация, то есть внедрение в клиническую практику технологий так называемой персонализированной (персонифицированной) медицины. В основе этих технологий -- индивидуальный подход к выбору ЛС и его режима дозирования с учетом факторов, влияющих на фармакологический ответ конкретного пациента. Известно, что индивидуальный фармакологический ответ зависит от множества факторов, таких как пол, возраст, сопутствующие заболевания, совместно применяемые ЛС, характер питания, биологические ритмы, вредные привычки и т.д. Однако 50% неблагоприятных фармакологических ответов (развитие осложнений или недостаточная эффективность) зависят от генетических особенностей пациента. Именно поэтому клиническая фармакогенетика предоставляет возможность индивидуализации выбора ЛС и режимов его дозирования на основании изучения генотипа конкретного пациента.

Как правило, особенности распределения и выведения препаратов связаны с мутациями генов, кодирующих ферменты, которые метаболизируют эти вещества и в зависимости от повышения или снижения его содержания и/или активности приводят к изменениям биотрансформации лекарственных средств. В последние годы внимание многих исследователей сосредоточено на изучении роли ферментативных систем метаболизма в биотрансформации различных лекарственных препаратов [1, 2]. Известно, что основным путем метаболизма широкого ряда гидразиновых и ариламиновых лекарственных средств и ксенобиотиков, включая канцерогены, является N-ацетилирование, которое происходит при участии фермента N-ацетилтрансферазы 2 (NAT2). Научные исследования показали, что по активности NAT2 человеческую популяцию можно разделить на 2 группы: с фенотипом быстрого и медленного N-ацетилирования [3].

N-ацетилтрансфераза 2 проявляет типичный генетический полиморфизм, поскольку быстрый и медленный фенотип ассоциирован с определенным генотипом NAT2 гена. В настоящее время изучается значительное число мутаций в гене NAT2, которые могут приводить к проявлению медленного фенотипа N-ацетилирования [3, 5, 6]. Определение фенотипа ацетилирования важно для оптимизации терапии и чаще всего используется в качестве фенотипического маркера, так как у медленных ацетиляторов могут развиться осложнения, а у быстрых ацетиляторов фармакотерапия может быть неэффективной. Получение и анализ фенотипических данных, касающихся особенностей метаболического статуса процессов ацетилирования, позволяет адекватно оценить реакцию организма на проводимое лечение и найти баланс между эффективностью и безопасностью фармакотерапии. Анализирующими методами, позволяющими выявлять фенотип N-ацетилятора, являются высокоэффективная жидкостная хроматография и спектрофотомерия. Однако, не смотря на их высокую чувствительность и способность измерять даже низкие концентрации, как лекарственных средств, так и их метаболитов, эти методы не всегда доступны для практического здравоохранения в силу их дороговизны, сложности процесса.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ<...